نشریه دامپزشکی ایران

نشریه دامپزشکی ایران

روش نوآورانه نیمه کمی Multiplex Single Primer Pair PCR برای تشخیص هم­زمان بعضی از پیروپلاسم ­های داخل سلولی اجباری

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان
1 دانشجوی دکترای تخصصی انگل‌شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
2 استاد گروه انگل‌شناسی، مرکز کنه و بیماری‌های منتقله، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
3 استاد گروه بهداشت و ‌کنترل مواد غذایی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
4 دانشیار گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه لرستان، خرم‌آباد، ایران
10.22055/ivj.2026.566326.2875
چکیده
گونه‌های بابزیا و تیلریا از اجرام پیروپلاسمی هستند که نشخوارکنندگان را در صنعت دامپروری آلوده کرده و خسارات اقتصادی بالایی را در سراسر جهان موجب می­شوند. تشخیص زود هنگام بیماری می‌تواند به مدیریت موفقیت‌آمیز درمان کمک کند. رنگ‌آمیزی گیمسا روشی رایج در سراسر جهان برای تشخیص پیروپلاسموز است که متأسفانه می‌تواند با برخی مشکلات جدی مانند تهیه لام‌های خونی مناسب و کیفیت رنگ‌آمیزی همراه باشد و گذشته از آن، آنالیز گسترش ­های تهیه شده نیز نیاز به تجربه‌ی بالایی دارد. روش‌های سرولوژیکی مانند ELISA یا IFAT نیز در برخی آزمایشگاه‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرند. همچنین روش‌های مولکولی که مبتنی بر آنالیز DNA بوده و دقیق و قابل اعتماد هستند نیز ترجیحاً در بسیاری از آزمایشگاه‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرند. هدف از مطالعه حاضر معرفی یک روش ساده و نوآورانه به نام semi-quantitative multiplex PCR بود که بتواند برای تشخیص همزمان گونه‌های بابزیا و تیلریا مفید واقع شود. برای این منظور، از آغازگرهای مشتق شده از ژن‌های 18S rRNA استفاده گردید که می‌توانند همزمان DNA را از میزبان‌ها (نشخوارکنندگان و کنه‌ها) و همچنین از گونه‌های بابزیا و تیلریا طوری تکثیر کنند که محصولات PCR آن­ها در اندازه با یکدیگر متفاوت و قابل تشخیص تفریقی باشند. نتایج مطالعه حاضر همان طور که انتظار می­رفت، نشان داد که طول متفاوت محصولات PCR از گونه‌های تیلریا و بابزیا، تمایز این انگل‌ها را از یکدیگر بر روی ژل آگارز ممکن می‌سازد. جالب توجه این است که این آغازگرها ناحیه ­ای از ژن 18S rRNA از سلول‌های میزبان را نیز به صورت همزمان تکثیر می­کنند و محصول PCR حاصله بزرگتر از آمپلیکون­های انگل‌ها می­باشد. از آن جایی که جفت آغازگر معرفی شده به صورت همزمان DNA میزبان و انگل را تکثیر می­کند، این ویژگی می‌تواند برای تجزیه و تحلیل نیمه کمی بار انگلی در نمونه‌ها مورد استفاده قرار گیرد. بنابراین می­توان تاکید کرد که جفت آغازگر معرفی شده (VetUTPiro) می‌تواند به صورت همزمان برای تشخیص تفریقی بابزیوز و تیلریوز و همچنین برای تجزیه و تحلیل نیمه کمی بار انگلی برای مدیریت قابل کنترل درمان مورد استفاده قرار گیرد.
کلیدواژه‌ها
موضوعات

Abdallah, M. O., Niu, Q., Yang, J., Hassan, M. A., Yu, P., Guan, G., ... & Yin, H. (2017). Identification of 12 piroplasms infecting ten tick species in China using reverse line blot hybridization. The Journal of Parasitology, 103(3), 221-227.
El-Ashker, M., Hotzel, H., Gwida, M., El-Beskawy, M., Silaghi, C., & Tomaso, H. (2015). Molecular biological identification of Babesia, Theileria, and Anaplasma species in cattle in Egypt using PCR assays, gene sequence analysis and a novel DNA microarray. Veterinary parasitology, 207(3-4), 329-334.
Estrada-Peña, A., Mihalca, A. D., & Petney, T. N. (Eds.). (2018). Ticks of Europe and North Africa: a guide to species identification. Springer.
Gubbels, J. M., De Vos, A. P., Van der Weide, M., Viseras, J., Schouls, L. M., De Vries, E., & Jongejan, F. (1999). Simultaneous detection of bovine Theileria and Babesia species by reverse line blot hybridization. Journal of clinical microbiology, 37(6), 1782-1789.
Hussain, S., Hussain, A., Aziz, M. U., Song, B., Zeb, J., Moutailler, S., ... & Sparagano, O. (2024). Exploring the Coinfection and Genetic Diversity of Multiple Tick‐Borne Pathogens in Livestock Population of Punjab, Pakistan. Transboundary and emerging diseases, 2024(1), 9958535.
Jaffer, O., Abdishakur, F., Hakimuddin, F., Riya, A., Wernery, U., & Schuster, R. K. (2010). A comparative study of serological tests and PCR for the diagnosis of equine piroplasmosis. Parasitology Research, 106(3), 709-713.
Jongejan, F., Du, C., Papadopoulos, E., Blanda, V., Di Bella, S., Cannella, V., ... & Wang, X. (2024). Diagnostic performance of a rapid immunochromatographic test for the simultaneous detection of antibodies to Theileria equi and Babesia caballi in horses and donkeys. Parasites & vectors, 17(1), 160.
Jouglin, M., Bonsergent, C., de La Cotte, N., Mege, M., Bizon, C., Courouce, A., ... & Malandrin, L. (2025). Equine piroplasmosis in different geographical areas in France: Prevalence heterogeneity of asymptomatic carriers and low genetic diversity of Theileria equi and Babesia caballi. Ticks and Tick-borne Diseases, 16(1), 102434.
Malekifard, F., Tavassoli, M., Yakhchali, M., & Darvishzadeh, R. (2014). Detection of Theileria equi and Babesia caballi using microscopic and molecular methods in horses in suburb of Urmia, Iran. In Veterinary research forum: an international quarterly journal, 5(2), 129.
Mendoza, F. J., Pérez-Écija, A., Kappmeyer, L. S., Suarez, C. E., & Bastos, R. G. (2024). New insights in the diagnosis and treatment of equine piroplasmosis: pitfalls, idiosyncrasies, and myths. Frontiers in Veterinary Science, 11, 1459989.
Modirrousta, H., Habibi, G., Shayan, P., Afshari, A., Mirjalili, A., & Abdigoudarzi, M. (2019). Determination of the Infectivity of Cryopreserved Theileria annulata Sporozoites in Tick Derived Stabilates Iran Ak-93 Strain, by in vivo and in vitro Methods. Iranian Journal of Parasitology, 14(4), 572.
Onyiche, T. E., Suganuma, K., Igarashi, I., Yokoyama, N., Xuan, X., & Thekisoe, O. (2019). A review on equine piroplasmosis: epidemiology, vector ecology, risk factors, host immunity, diagnosis and control. International journal of environmental research and public health, 16(10), 1736.
Onyiche, T. E., Taioe, M. O., Molefe, N. I., Biu, A. A., Luka, J., Omeh, I. J., ... & Thekisoe, O. (2020). Equine piroplasmosis: An insight into global exposure of equids from 1990 to 2019 by systematic review and meta-analysis. Parasitology, 147(13), 1411-1424
Ranjbar-Bahadori, S., Eckert, B., Omidian, Z., Shirazi, N. S., & Shayan, P. (2012). Babesia ovis as the main causative agent of sheep babesiosis in Iran. Parasitology Research, 110(4), 1531-1536.
Riaz, M., Nasreen, N., Khan, A., & Said, M. B. (2023). Differential diagnosis of theileriosis through blood smear examination and polymerase chain reaction in small ruminants from Pakistan. Open Veterinary Journal, 13(6), 697-704.
Rosenblatt, J. E., Reller, L. B., & Weinstein, M. P. (2009). Laboratory diagnosis of infections due to blood and tissue parasites. Clinical infectious diseases, 49(7), 1103-1108.
Shayan, P., & Rahbari, S. (2005). Simultaneous differentiation between Theileria spp. and Babesia spp. on stained blood smear using PCR. Parasitology Research, 97(4), 281-286.
Shayan, P., Hooshmand, E., Rahbari, S., & Nabian, S. (2007). Determination of Rhipicephalus spp. as vectors for Babesia ovis in Iran. Parasitology research, 101(4), 1029-1033.
Tian, Z., Du, J., Yang, J., Liu, A., Liu, X., Liu, G., & Yin, H. (2015). A PCR-RFLP Assay targeting RPS8 gene for the discrimination between bovine Babesia and Theileria species in China. Parasites & Vectors, 8(1), 475.
Tirosh-Levy, S., Gottlieb, Y., Fry, L. M., Knowles, D. P., & Steinman, A. (2020). Twenty years of equine piroplasmosis research: Global distribution, molecular diagnosis, and phylogeny. Pathogens, 9(11), 926.
Walker, A. R. (2003). Ticks of domestic animals in Africa: a guide to identification of species (Vol. 74). Edinburgh: Bioscience Reports.

مقالات آماده انتشار، اصلاح شده برای چاپ
انتشار آنلاین از 07 شهریور 1405