مقایسه دو محیط Embryo Holding و HTCM-199 در نگهداری تخمک های نابالغ گاو در خارج از انکوباتور و تأثیر آن بر تولید بلاستوسیت

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 استادیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران

2 دانشیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران

3 استادیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران

چکیده

    بسیاری از تغییرات سلولی در روند پیری تخمک­ها بیان شده است، ولی بررسی­های کمی برای زمان و دمای مناسب نگهداری آن­ها انجام گرفته است.  اساسی­ترین مشکل، مسافت و زمانی است که برای انتقال تخمک به آزمایشگاه وجود دارد و حفاظت از تخمک­های نابالغ بدون کاهش توانایی آن­ها برای لقاح داخل آزمایشگاهی بسیار سودمند است.  هدف از مطالعه حاضر استفاده از محیط Embryo Holding Medium (EH-Syngro) و محیط HTCM-199 و مقایسه آن­ها برای نگهداری تخمک­های نابالغ در دمای اتاق و بدون انکوباتور می­باشد.  در مجموع تعداد 5268 عدد تخمک آزمایش شدند.  تخمک­ها در گروهای مختلف در دماهای 4، 22 و 38 درجه سانتی­گراد در مدت زمان 6، 12، 18 و  24 ساعت نگهداری شدند.  پس از سپری شدن این زمان­ها، وارد محیط بلوغ استاندارد شدند و در نهایت عملیات IVF انجام شد.  در زمان نگهداری 6 ساعته، میزان بلوغ تخمک و تولید بلاستوسیت در گروه­های آزمایشی و کنترل اختلاف آماری معنی­داری نداشتند.  در زمان 12 ساعت تعداد بلوغ تخمک­ها و تعداد تولید بلاستوسیت در تمامی گروه‌ها نسبت به گروه استاندارد به ‌طور معنی­داری کم­تر بود.  کم­ترین میزان بلوغ و تولید بلاستوسیت در دمای 4 درجه سانتی­گراد می­باشد.  محیط EHT و HTCM-199 در تحقیق حاضر نشان دادند که می­توانند برای نگهداری تخمک نابالغ تا زمان 6 ساعت در دمای اتاق مفید باشند و تأثیر سویی در بلوغ تخمک­ها و تولید بلاستوسیت نداشته باشد و از همه مهم­تر عدم نیاز به انکوباتور جهت حمل و نقل تخمک­ها به آزمایشگاه است.

کلیدواژه‌ها

موضوعات


Adona, P.R., Pires, P.R., Quetglas, M.D., Schwarz, K.R., and Leal, CL (2008) Nuclear maturation kinetics and in vitro embryo development of cattle oocytes prematured with butyrolactone I combined or not combined with roscovitine. Anim Reprod Sci 104, 389-397.
Alm, H., Choi, Y., Love, L., Heleil, B., Torner, H., and Hinrichs, K. (2008) Holding bovine oocytes in theabsence of maturation inhibitors: kinetics of in vitro maturation and effect on blastocyst development after in vitro fertilization. Theriogenology 70, 1024–1029.
Azari-Dolatabadab. N., Rahmani.  H.R., Hajian. M., Ostadhosseini. S., and Nasr-Esfahani. M.H. (2016). Effects of cilostamide and/or forskolin on the meiotic resumption and development competence of growing ovine oocytes selected by brilliant cresyl blue staining. Theriogenology 85, 1483–1490.
Bilodeau-Goeseels, S. (2011) Cows are not mice: The role of cyclic AMP, phosphodiesterases, and adenosine monophosphate-activated protein kinase in the maintenance of meiotic arrest in bovine oocytes. Mol Reprod Dev 78, 734–743.
Blondin, P (2017) Logistics of large scale commercial IVF embryo production. Reprod Fert Dev; 29, 32–36.
Boni R (2012) Ovum pick-up in cattle: a 25 yr retrospective analysis. Anim Reprod 9, 362–369.
Carrocera, S., Caamaño, J.N., Trigal, B,. Martín, D,. and Díez, C (2016) Developmental kinetics of in vitro-produced bovine embryos: An aid for making decisions. Theriogenology 85(5):822-827.
Dini, P., Pascottini, O.B., Ducheyne, K., Hostens, M., and Daels, P. (2016) Holding equine oocytes in a commercial embryo-holding medium: New perspective on holding temperature and maturation time. Theriogenology 86, 1361–1368.
Lapčík, L., Lapcik, L., De Smedt, S., Demeester, J., and Chabrecek, P (1998) Hyaluronan: preparation structure, properties, and applications. Chem Rev 98: 2663–2684.
Osvaldo, B., Maaike, C., Ann Van, S., and Opsomer, G (2018). Holding immature bovine oocytes in a commercial embryo holding medium: High developmental competence for up to 10 h at room temperature. Theriogenology; 107, 63-69.
Patrick, L.,  Andras, D.,  Trudee, F., Xiangzhong, Y., and Maurice, B (2000) Bovine oocyte and embryo development following meiotic inhibition with butyrolactone I. Molecular Reproduction and Development; 57, 204-209.
Ponderato, N., Lagutina, I., Crotti, G., Turini, P., Galli, C., and Lazzari, G (2001) Bovine oocytes treated prior to in vitro maturation with a combination of butyrolactone I and roscovitine at low doses maintain a normal developmental capacity. Mol Reprod Dev; 60, 579–585.
Suttirojpattana, T., Somfai, T., Matoba, S., Nagai, T., Parnpai, R., and Gesh, M (2016) The effect of temperature during liquid storage of in vitro-matured bovine oocytes on subsequent embryo development. Theriogenology 85(3): 509-518.
Tanghe, S. , Van Soom, A. , Nauwynck, H. , Coryn, M. , and de Kruif, A (2002) Minireview: functions of the cumulus oophorus during oocyte maturation, ovulation, and fertilization. Mol Reprod Dev;61, 414-424
Wakayama, S., Thuan, N.V., Kishigami, S., Ohta, H., Mizutani, E., Hikichi, T., Miyake, M., and Wakayama, T (2004) Production of offspring from one-day-old oocytes stored at room temperature. J Reprod Dev 50(6):627-637.
Wang, T.Y., Li, Q., Li, Q., Li, H., Zhu, J., Cui, W., Jiao, G.Z, and Tan, J.H (2014) Non-frozen preservation protocols for mature mouse oocytes dramatically extend their developmental competence by reducing oxidative stress. Mol Hum Reprod 20(4),318-329.