دانشگاه شهید چمران اهواز نشریه دامپزشکی ایران 1735-6873 15 1 2019 03 21 Expression of the G1 epitope of bovine ephemeral fever virus G glycoprotein gene by pET24-G1 recombinant construct in Escherichia coli بیان اپیتوپ G1 از ژن گلیکوپروتئین G ویروس تب بی‏ دوام گاوی توسط سازه نوترکیب pET24-G1 در اشرشیاکلی 15 24 83630 10.22055/ivj.2018.83203.1902 FA رضا پسندیده دانش آموخته دکتری ژنتیک و اصلاح نژاد دام، دانشکده علوم دامی و صنایع غذایی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی خوزستان، ملاثانی، ایران 0000-0003-3002-8605 محمد تقی بیگی نصیری استاد گروه علوم دامی، دانشکده علوم دامی و صنایع غذایی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی خوزستان، ملاثانی، ایران 0009-0000-8552-6666 مسعودرضا صیفی آباد شاپوری استاد گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید چمران اهواز، اهواز، ایران Journal Article 2017 09 27     Bovine ephemeral fever (BEF) is a viral disease of cattle and water buffalo seen in some provinces of Iran, generally southern and warm regions in recent years. The G glycoprotein is the main protective antigen of the bovine ephemeral fever virus (BEFV) and the target of anti-BEFV neutralizing antibodies. The aim of the present study was cloning and expression of the G1 epitope of BEF virus G glycoprotein gene in a prokaryotic system. For this purpose, the G1 epitope was cloned in a prokaryotic expression vector, pET-24a(+), under the control of the T7 promoter and subsequently the recombinant pET24-G1 construct was transformed into Rosetta strain of <em>Escherichia coli</em>. Expressed recombinant protein was analyzed using SDS-PAGE and immunoblotting methods. SDS-PAGE analysis showed that a protein with ~18 kDa molecular weight, consistent with the expected molecular weight of recombinant protein fused to 6xHis tag, was expressed. Immunoblotting analysis showed that the expressed G1 protein specifically reacted with a mouse polyclonal serum against BEFV. Thus, in this study the G1 protein of BEFV was successfully expressed by the pET24-G1 recombinant construct in <em>Escherichia coli</em>. Based on the results of this study, immunization and the efficacy of this product can be consider as a possible candidate for the production of subunit vaccine against the virus in animal models.     تب بی‏دوام گاوی (BEF) یک بیماری ویروسی در گاو و گاومیش است که در سال‏های اخیر در برخی از استان‏های ایران به ویژه مناطق جنوبی و گرم دیده شده است.  گلیکوپروتئین G، آنتی‏ژن اصلی حفاظتی ویروس تب‏ بی‏دوام گاوی (BEFV) و هدف آنتی‏بادی‏های خنثی کننده ضدویروسی است.  هدف از مطالعه­ی حاضر، کلونینگ و بیان اپیتوپ G1 از ژن گلیکوپروتئین G ویروس BEF ‏در یک سیستم پروکاریوتی بود.  به این منظور، اپیتوپ G1 درون ناقل بیانی پروکاریوتی (+)pET-24a، تحت کنترل پروموتر T7، کلون و سپس سازه­ی نوترکیب pET24-G1 به سویه­ی Rosetta <em>اشرشیاکلی</em> منتقل شد.  بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از روش‏های SDS-PAGE و ایمونوبلات بررسی شد.  در آنالیز SDS-PAGE پروتئینی با وزن مولکولی تقریبی 18 کیلو دالتون رویت شد که با وزن مورد انتظار برای پروتئین نوترکیب متصل به دنباله­ی 6 تایی هیستیدین هم­خوانی داشت.  آنالیز ایمونوبلات نشان‏ داد که پروتئین G1 بیان شده به طور اختصاصی با سرم پلی کلونال موشی حاوی آنتی‏بادی ضد BEF واکنش داد.  بنابراین در این مطالعه پروتئین G1 از ویروس BEF با موفقیت توسط سازه­ی نوترکیب pET24-G1 در <em>اشرشیاکلی</em> بیان شد.  براساس نتایج این مطالعه می­توان ایمنی­زایی و کارآیی این محصول را به عنوان کاندید احتمالی جهت تولید یک واکسن زیرواحدی علیه این ویروس در مدل­های حیوانی بررسی نمود. https://www.ivj.ir/article_83630_cb3690fc9b8a230eb501d00f8e8a02f2.pdf