دانشگاه شهید چمران اهواز نشریه دامپزشکی ایران 1735-6873 13 1 2017 04 21 The effects of fig leaf extract on the matrix metalloproteinases (MMPs) activities in the Fibroblast (HEP2) cell culture بررسی اثر عصاره گیاهی برگ انجیر برفعالیت ماتریکس متالوپروتئینازهای (MMPs) در کشت سلول های فیبروبلاست (HEP2) 13 25 45987 10.22055/ivj.2017.47110.1682 FA ناهید اطیابی استاد گروه بیماریهای داخلی، دانشکده ی دامپزشکی، دانشگاه تهران گلشاد نیکنام دانش آموخته ی دکترای حرفه ای، دانشکده ی دامپزشکی، دانشگاه تهران سید مهدی نصیری دانشیار گروه بیماریهای داخلی، دانشکده ی دامپزشکی، دانشگاه تهران محمد طاهری کارشناس آزمایشگاه/ دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران. Journal Article 2015 12 20 Matrix metalloproteinases (MMPs) are zinc-dependent cellular proteases. These enzymes act on cell behavior, and are capable of degrading of extracellular matrix proteins. So they play a significant role in the proliferation and metastasis of malignant tumor cells. Nowadays, there has been interests towards the use of natural phytochemicals, present in natural plants such as fruits, leaves, latex and extracts of fig (Ficus carina) which were widely used, in traditional medicine, as an antibacterial, antifungal and or ointment products for treatment of skin inflammation and tumors. The aim of this study was to evaluate the effects of fig leaf extract on the activity of MMPs, in Fibroblast (HEP2) cell culture. For this purpose, fig leaf extract was prepared in three forms: 1) aqueous, 2) hydro-alcoholic and 3) alcoholic extracts. The 24 wells cell culture plates, containing HEP2 cells, were filled with different concentration of these extracts as tests. It was considered control wells, with the same content as tests, without the extracts. The plates were incubated at 37° C and 5%CO2. The effects of different extracts, were investigated after 24, 48 and 72 hours, by determination of cell viability and cytotoxicity by trypan blue staining and Zymography test, for MMPs Activities. The result showed, the alcoholic extract caused cell death, completely, at concentration of 0.5% (5 l) and 0.1% (1 l), after 24 and 48 hours, respectively. Hydro_ alcoholic extract caused cell death, at concentration of 1% (10 l), after 72 hours. Zymography test showed the inhibitory effect of fig leaf extract on the MMPs activities, in all tested doses. All control tests showed enzyme activities with the same molecular weight bands, 92KD, as were seen in standard Marker belonged to MMP9. The present study, confirmed the inhibitory effect of fig leaf extract on the activity of MMPs in cell cultures.     هدف از این مطالعه، بررسی اثر مهاری عصاره­ی برگ انجیر (<em>Ficus Carica</em>) بر فعالیت ماتریکس متالوپروتئینازها و در نتیجه ممانعت از تکثیر و متاستاز سلول­های توموری، در کشت سلول فیبروبلاست (HEP2) است.  به این منظور، عصاره­ی برگ انجیر به سه شکل آبی، آبی - الکلی و الکلی تهیه شد.  با استفاده از پلیت­های 24 خانه­ای کشت سلول حاوی رده­ی سلولی فوق، به ترتیب مقادیر µl 5 عصاره­ی آبی (غلظت نهایی 5/0 درصد)، µl 10 عصاره­ی آبی (غلظت نهایی 1 درصد)، µl 5 عصاره­ی آبی – الکلی (غلظت نهایی 5/0 درصد)، µl 10 عصاره­ی آبی – الکلی (غلظت نهایی 1 درصد)، µl 1 عصاره­ی الکلی (غلظت نهایی 1/0 درصد) و µl 5 عصاره­ی الکلی (غلظت نهایی 5/0 درصد) اضافه شد.  برای هر گوده، یک گوده کنترل، با محتویات مشابه گوده تست اما فاقد عصاره، در نظر گرفته شد.  سپس پلیت­ها در گرمخانه کشت سلول گذاشته شدند و اثرات عصاره پس از گذشت 24، 48 و 72 ساعت، با استفاده از روش رنگ­آمیزی تریپان بلو برای مشاهده سیتوتوکسیسیتی و روش زایموگرافی ژلاتین برای دیدن باندهای هضمی، مورد بررسی قرار گرفتند.  نتایج به دست آمده در بررسی با میکروسکوپ معکوس، نشان داد، عصاره­ی الکلی به میزان 5 و 1 میکرولیتر به ترتیب پس از 24 و 48 ساعت به طور کامل موجب مرگ سلولی گردید.  پس از گذشت 72 ساعت، مقدار µl 10 از عصاره­ی آبی- الکلی برگ انجیر نیز، باعث مرگ سلول­ها شد.  در بررسی فعالیت آنزیم­ها به روش زایموگرافی، در تمامی گوده­های تست، اثر مهاری عصاره­ی برگ انجیر بر فعالیت ماتریکس متالوپروتئینازها مشاهده شد.  از طرفی در تمامی گوده­های کنترل باند هضمی ایجاد شده با مقایسه با مارکر استاندارد مورد استفاده، وزن مولکولی MMP9 را نشان می­داد.  این بررسی اثر مهاری عصاره­ی برگ انجیر بر فعالیت ماتریکس متالوپروتئینازها را تأیید می­کند.  از این رو، توصیه می­شود با استفاده از روش­های مولکولی در کنار زایموگرافی و انجام مطالعات بالینی، به بررسی بیش­تر اثر عصاره­ی این گیاه بر انواع  متالوپروتئینازها به طور جداگانه پرداخته شود. https://www.ivj.ir/article_45987_4fcd88edc7247e6954911971421431fc.pdf