دانشگاه شهید چمران اهواز نشریه دامپزشکی ایران 1735-6873 9 2 2013 06 01 Molecular identification of peptide toxin MeBTX from venom glands of scorpion (Mesobuthus eupeus) in Iran شناسایی مولکولی پپتیدتوکسین MeBTX از غدد زهری عقرب مزوبوتوس اپئوس ایران 24 33 2954 FA عباس جلودار هیات علمی علیرضا مسعودی سعید مهرزادی عاطفه داوودی Journal Article 2012 01 08 Considering the lack of knowledge of the molecular biology of scorpion venom antibacterial peptides, as a first step we sequenced and identified a full-length sequence from the venom glands of scorpion (Mesobuthus eupeus) through RT-PCR. Scorpion toxin consists of different types of toxins and enzymes which are encoded by individual genes. Antimicrobial peptides are cytolytic peptides that can rapidly kill a broad range of microbes and have additional activities that impact on the quality and effectiveness of innate responses and inflammation. These peptides had been found from a wide variety of organisms in the last few years. Scorpions were provided and identified by Razi Institute in Ahvaz. The origin of the total RNA was the telson, the last segment of the tail containing the two venom glands. Using RNX plus solution (CinnaGen, Iran), the total RNA was extracted according to the manufacturer’s instructions. Then, cDNA was synthesized with the extracted total RNA as template and oligo(dT) as primer. In order to amplify cDNA encoding neurotoxin, RT-PCR was performed. The amplified cDNA fragments were sequenced in both strands according to the dideoxy termination method. Sequence comparisons with GenBank database were done using the BLAST software. Based on the sequence data, the complete sequence contained 273 nucleotides called MeBTXA signal peptide sequence was identified, and the glycine at position 20 was assumed to represent the start of the mature protein. Remarkably, they share 96, 94 and 67% similarity with the long-chain potassium ion channel blocker from Mesobuthus martensii, Buthus occitanus Israelis and Tityus costatus. Domain analysis of the protein showed "Arthropod defensin" between amino acid resides 55 to 85. This domain which is rich in cysteine is belongs to the antibacterial peptide family and has effect on the gram positive bacteria. This high sequence similarity together with completely conserved in the positions of all 6 cysteine indicated that this gene is a new member of β-toxin from the Iranian M. eupeus which may originate from a common ancestor. پلی‌پپتید‌های زهر عقرب علاوه بر عملکرد روی کانال‌های یونی، در فعالیت‌های ضد میکروبی نیز نقش دارند. در این مطالعه یک پپتید توکسین از زهر یکی از فراوان‌ترین عقرب‌های بومی ایران به نام مزوبوتوس اپئوس (Mesobuthus eupeus) تکثیر و توالی نوکلئوتیدی آن مورد شناسایی ملکولی قرار گردید. پس از شناسایی عقرب، مجموع کل RNA از غده زهر آن استخراج و غلظت آن با دستگاه اسپکتروفوتومتر اندازه‌گیری شد. سپس به منظور ساخت cDNA، از کل RNA به عنوان رونوشت و از الیگو (dT) اصلاح شده به عنوان آغازگر استفاده گردید. در ادامه، با استفاده از تکنیک RT-PCR پس از بهینه‌سازی شرایط PCR، یک قطعه cDNA تکثیر گردید. با استفاده از برنامه آنالیز پپتید راهنما مشخص شد که این پلی‌پپتید کد شده توسط این cDNA دارای یک پپتید راهنما می‌باشد که اسید آمینه گلایسین در وضعیت بیستمین اسید آمینه به عنوان شروع پلی‌پپتید بالغ محسوب می‌گردد. همترازی این پلی‌پپتید با توالی‌های مشابه در بانک ژن NCBI نشان داد که این ژن به میزان 96، 94 و 67 درصد با نروتوکسین‌های طویل از عقرب‌های martensii, M.، Buthus occitanus Israelis و Tityus costatus به ترتیب، شباهت دارد. مقایسه این cDNA با ژن‌های مشابه از دیگر گونه‌های عقرب نشان داد که این ژن در ناحیه بین اسید آمینه 85-55 حاوی یک دومین بنام "Arthropod defensin" است. این دومین که غنی از سیستئین می‌باشد به خانواده‌ای از پپتید‌های ضد باکتریایی که عمدتاً روی میکروب‌های گرم مثبت مؤثرند، متعلق است. وجود تشابه بالا به همراه وجود 6 سیستئین محافظت شده و همچنین نتایچ فیلوژنی همگی دلالت بر این دارد که این ژن احتمالاً یک عضو جدید از خانواده پپتید توکسین‌ها از عقرب مزوبوتوس اپئوس ایران است که در مقایسه با توالی‌های مشابه از منشاء مشترکی سرچشمه گرفته‌اند.

https://www.ivj.ir/article_2954_dc20d1211f3e7a99d775b26052e0163e.pdf