دانشگاه شهید چمران اهواز نشریه دامپزشکی ایران 1735-6873 21 4 2026 01 21 Chicken Major Histocompatibility Complex Genotyping by High Resolution Melting Analysis ژنوتایپینگ مجتمع عمده پذیرش بافتی طیور با روش تحلیل دقیق دمای شکافت 43 52 240689 10.22055/ivj.2026.560799.2869 FA عمار رمضانی دانشجوی دکترای تخصصی ایمنی‌شناسی، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران غلامرضا نیکبخت بروجنی استاد گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران 0000-0002-2970-5827 نریمان شیخی استادیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران کاوه پروندار اسدالهی استادیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Journal Article 2025 11 19 The chicken major histocompatibility complex (MHC), known as the B-locus or serological blood group, is responsible for controlling autoimmune and resistance to viral, bacterial, and parasitic diseases. The microsatellite LEI0258, as a reliable marker for avian MHC typing, can be used to determine the identity of different populations and individual or breed characteristics in academic and applied studies. In this study, High Resolution Melting (HRM) analysis was used to determine MHC genotypes based on the LEI0258 microsatellite in Ross 308 broiler chickens. To this end, genotypes were first determined by conventional PCR and electrophoresis methods, as well as fragment analysis, and then the findings were compared and analyzed with the results of the HRM assay. From 100 samples, 5 genotypes were identified in conventional PCR and electrophoresis assays, as well as fragment analysis. These genotypes included alleles with molecular weights of 448, 385, 300, and 207 base pairs. In HRM analysis, normalized fluorescence changes versus temperature (degrees Celsius) were evaluated for five different genotypes. The results showed that the HRM method is capable of discriminating different genotypes as well as homozygous and heterozygous cases. Overall, it seems that the high-resolution melting analysis method can be applied to study the diversity of avian MHC genes. Although this technique cannot precisely identify the alleles of each chromosome, due to the co-dominant nature of MHC genes, the results are acceptable for assessing genetic composition and determining genotypes. مجتمع عمده پذیرش بافتی (MHC) در طیور با عنوان جایگاه ژنی B یا گروه خونی سرولوژیکی مسئول کنترل مقاومت به بیماری‌ها از جمله بیماری‌های خود ایمن، ویروسی، باکتریائی و انگلی است. ریزماهواره LEI0258 به عنوان یک شاخص معتبر برای تایپینگ MHC بافتی طیور می‌تواند برای تعیین هویت جمعیت های مختلف و ویژگی های فردی یا نژادی در مطالعات آکادمیک و کاربردی استفاده شود. در این تحقیق از روش‌ تحلیل دقیق دمای شکافت (HRM) برای تعیین ژنوتیپ‌های MHC مبتنی بر ریزماهواره LEI0258 طیورگوشتی نژاد Ross 308 استفاده شد. بدین منظور ابتدا ژنوتیپ‌ها با روش‌های معمول PCR و الکتروفورز و همچنین تحلیل قطعه ای مشخص شدند و سپس نتایج روش معمول با نتایج آزمون HRM مورد مقایسه و بررسی قرار گرفتند. از تعداد 100 نمونه 5 ژنوتیپ در آزمون‌های معمول PCR و الکتروفورز و همچنین تحلیل قطعه ای مشخص شدند. این ژنوتیپ‌ها شامل آلل‌های با وزن ملکولی 448، 385، 300 و 207 جفت باز بودند. در تحلیل HRM، تغییرات فلورسانس نرمال‌شده نسبت به دما (درجه سانتی گراد) برای پنج ژنوتیپ مختلف بررسی شد. نتایج نشان داد که روش HRM قادر است ژنوتیپ‌های مختلف و موارد هوموزیگوت و هتروزیگوت را تفکیک کند. در مجموع به نظر می‌رسد روش تحلیل دقیق دمای شکافت را بتوان برای بررسی تنوع ژن‌های MHC طیور به کار برد. اگرچه با این روش نمی‌توان دقیقا آلل‌های هر کرومزوم را تشخیص داد ولی با توجه به ماهیت هم‌بارز ژن های MHC نتایج برای بررسی ترکیب ژنتیکی و تعیین ژنوتیپ‌ها قابل قبول خواهند بود.

https://www.ivj.ir/article_240689_ecbf60400a6e29d084ba20c4d179d8e4.pdf