دانشگاه شهید چمران اهواز نشریه دامپزشکی ایران 1735-6873 20 1 2024 05 21 Fractionation and enzymes activity measurement of the scorpion Androctinus crassicoda (Scorpionida: Buthidae) venom جداسازی فراکسیون‌ها و اندازه‌گیری فعالیت آنزیم‌های زهر عقرب Androctinus crassicoda (Scorpionida: Buthidae) 109 120 197749 10.22055/ivj.2023.422895.2646 FA فاطمه ثعلبی استادیار گروه جانوران سمی و تولید آنتی‌ونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران 0000-0002-1753-5162 محمد نعمتی استادیار گروه جانوران سمی و تولید آنتی‌ونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران مهسا لاری بقال کارشناس گروه جانوران سمی و تولید آنتی‌ونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران Journal Article 2023 10 29 The scorpion of Androctinus crassicauda is one of the Buthida family members whose neurotoxic venom is deadly to humans. Enzymes are abundant components of animal venom that play roles in local and systemic symptoms following envenoming. The venom of this scorpions contains various pathological enzymes, among which studies have reported the toxic effects of venom's hyaluronidase and phospholipase A2 enzymes. This study aimed to measure the activity of venom enzymes of hyaluronidase and phospholipase A2 from scorpion of A. crassicauda and its fractions. For this purpose, the venom from scorpion of A. crassicauda were collected and lyophilized. The whole venom was fractionated on a gel filtration (Sephadex G-50) column. Then protein concentration, hyaluronidase and phospholipase A2 activity of the crude venom and its fractions were determined. Gel filtration on Sephadex G-50 and SDS-PAGE electrophoresis of A. crassicauda crude venom revealed four protein picks and 15 protein bands with the majority of molecular masses between 10.0 and 15.0 kDa, respectively. The supernatant obtained from crude venom clarification showed protein content 71.80%, high hyaluronidase (92.40%) and low PLA2 (302±2.1 mg/U) enzyme activity. Fraction 1 showed highest hyaluronidase and phospholipase A2 activities. We found that pH 5 is the optimum pH for hyaluronidase activity and phospholipase A2 activity increases with increasing incubation time. In conclusion, venom of A. crassicauda displayed the hyaluronidase and phospholipase A2 enzymes activity, which were separated by gel filtration chromatography in fraction I. Such information is important both for predicting the biological activity of venom components and useful for developing effective antivenoms based on these venom components. عقرب Androctinus crassicauda یکی از اعضای خانواده بوتیده است که سم عصبی آن برای انسان کشنده است. آنزیمها اجزای فراوان زهر حیوانی هستند که در ایجاد علائم موضعی و سیستمیک ناشی از مسمومیت نقش دارند. زهر این عقرب حاوی آنزیمهای پاتولوژیک مختلفی است که از بین آنها، مطالعات اثرات سمی آنزیمهای هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر را گزارش کردهاند. این مطالعه با هدف اندازهگیری فعالیت آنزیمهای هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر عقرب A. crassicauda و فراکسیونهای آن انجام شد. برای این منظور، سم عقرب A. crassicauda جمعآوری و لیوفیلیز شد. اجزای کل زهر روی یک ستون فیلتراسیون ژل (Sephadex G-50) جدا شدند. سپس غلظت پروتئین، فعالیت هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر خام و فراکسیون آن تعیین شد. فیلتراسیون ژل روی Sephadex G-50 و الکتروفورز SDS-PAGE سم خام A. crassicauda به ترتیب چهار فرکشن پروتئینی و 15 باند پروتئینی با اکثریت جرم‌های مولکولی بین 0/10 تا 0/15 کیلو دالتون را نشان دادند. مایع رویی به دست آمده از شفاف‌سازی زهر خام، محتوای پروتئین 80/71 درصد، فعالیت آنزیم هیالورونیداز بالا (40/92 درصد) و فعالیت آنزیم PLA2 پایین (1/2 ± 302 میلی‌گرم در واحد) را نشان داد. فراکسیون 1 بیشترین فعالیت هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 را نشان داد. ما دریافتیم که pH 5، pH بهینه برای فعالیت آنزیم هیالورونیداز است و فعالیت آنزیم فسفولیپاز A2 با افزایش زمان انکوباسیون افزایش می‌یابد. در نتیجه، فعالیت آنزیم‌های هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 در سم A. crassicauda یافت شد و کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل این آنزیم‌ها را در فرکشن 1 جدا کرد. چنین اطلاعاتی هم برای پیش‌بینی فعالیت بیولوژیکی اجزای زهر مهم است و هم برای توسعه پادزهرهای مؤثر مفید است.

https://www.ivj.ir/article_197749_8d6a29d400c1264355c254534080a595.pdf