مقایسه تکثیر و پاساژهای متوالی تاکی زوئیت های نئوسپورا کنینوم در سل لاین های Vero و TLI

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 استادیار گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تبریز

2 دانش آموخته دکترای حرفه ای، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تبریز

3 دانشیار موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، شعبه شیراز، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی ایران

4 استاد گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شیراز

چکیده

نئوسپورا کنینوم یک عامل بیماریزای مهم در گاو و سگ می باشد. امروزه به طور گسترده ای از کشت سلولی به منظور جداسازی و تکثیر نئوسپورا برای اهداف مختلفی استفاده می شود. در مطالعه حاضر، میزان یکسانی از تاکی زوئیت انگل در مجاورت میزان یکسانی از سل لاین های Vero (سلول اپیتلیال کلیه میمون سبز آفریقایی) و سل لاین TLI (لنفوسیت ترانسفورم شده با تیلریا) قرار گرفت و به مدت سه ماه پاساژ متوالی داده شدند. به منظور ارزیابی میزان حدت تاکی زوئیت های به دست آمده از هر سل لاین، دوزهای مختلف انگل (5000، 10000 و 15000 تاکی زوئیت در هر میکرولیتر)، به تخم مرغ جنین دار تزریق شد و میزان تلفات ثبت و از بافتهای مغز، قلب و کبد آنها جهت مطالعات هیستوپاتولوژی و مولکولی نمونه برداری انجام شد. نتایج این مطالعه نشان داد که سل لاین TLI توان تکثیر مناسبی را برای نئوسپورا نسبت به سل لاین Vero دارد و اختلاف آماری معنی داری در تعداد تاکی زوئیت های رها شده از دو سل لاین مشاهده نشد (p> 0.05). نتایج میزان تلفات، مرگ و میر 100% در تخم مرغ های تلقیح شده به وسیله دوز های مختلف تاکی زوئیت های به دست آمده از هر دو سل لاین را نشان داد که البته این میزان تلفات، وابسته به دوز تلقیح شده بود؛ بدین صورت که در دوزهای بالاتر، تلفات زودتر مشاهده شد. بررسی های هیستوپاتولوژیک، هپاتیت و میوکاردیت غیرچرکی تک هسته ای را نشان داد. با مطالعات مولکولی و ایمنوهیستوشیمی حضور آنتی ژن و ژنوم نئوسپورا در بافت های مختلف تائید شد. یافته های این پژوهش، سل لاین مناسبی را جهت تکثیر و پاساژ متوالی نئوسپورا کنینوم معرفی می کند که می تواند در دستیابی به روش سریعتر و موثرتر جهت تهیه واکسن زنده و همچنین صرفه جویی در زمان و هزینه ها بسیار کمک کننده باشد.

کلیدواژه‌ها

موضوعات


صدربزاز، علیرضا (1383).  بررسی آلودگی به نئوسپورا کنینوم با روش IFA و بررسی آسیب­شناسی و جداسازی تک یاخته از جنین­های سقط شده در گاوهای شیری برخی از گاوداری­های مشهد. پایان­نامه دکترای تخصصی انگل­شناسی دامپزشکی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، شماره 198.

Assoian, R.K. (1997). Anchorage-dependent cell cycle progression. Journal of Cell Biology, 136: 1-4.

Bartley, P.M.; Wright, S.; Sales, J.; Chianini, F.; Buxton, D. and Innes, E.A. (2006). Long-term passage of tachyzoites in tissue culture can attenuate virulence of Neospora caninum in vivo. Parasitology, 133: 421-432.

Cadore, C.C.; Vogel, F.S.; Flores, E.F.; Sangioni, L.A. and Camillo, G. (2009). Susceptibility of cell lines and primary cell cultures to Neospora caninum. Ciencia Rural, Santa Maria 39 (5): 1581-1585.

Chamberland, S. and Current, L.W. (1991). Use of mouse macrophage cell lines for in vitro propagation of Toxoplasma gondii RH tachyzoites. Proceedings of the Society Experimental Biology Medicine, 150-157.

Couatarmanach, A.; Andre, P.; Le Minous, D.; Martin, L.; Robert, R. and Deunff, J. (1991). In vitro culture and cloning of Toxoplasma gondii in a newly established cell line derived from TG180. International Journal for Parasitology 21, 129-132.

Dubey, J.P. (2003). Review of Neospora caninum and neosporosis in animals. Korean Journal of Parasitology. 41: 1-16.

Dubey, J.P.; Carpenter, J.L.; Speer, C.A.; Topper, M.J. and Uggla, A. (1988). Newly recognized fatal protozoan disease of dogs. Journal of the American Veterinary Medical Association, 192: 1269-1285.

Dubey, J.P. and Schares, G. (2006). Diagnosis of bovine neosporosis. Veterinary Parasitology, 141: 1-34.

Dubey, J.P.; Alvarado-Esquivel, C.; Liesenfeld, O.; Herrera-Flores, R.G.; Ramirez-Sanchez, B.E.;  Gonzalez-Herrera, A. et al. (2007a). Neospora caninum and Toxoplasma gondii antibodies in dogs from Durango city, Mexico. Journal of Parasitology. 93: 1033-1035.

Dubey, J.P.; Schares, G. and Ortega-Mora, L.M. (2007b). Epidemiology and control of neosporosis and Neospora caninum. Clinical Microbiology Reviews, 20: 323-367.

Evans, R.; Chatterton, J.M.W.; Ashburn, D.; Joss, A.W.L. and Ho-Yen D.O. (1999). Cell-culture system for continuous production of Toxoplasma gondii tachyzoites. European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 18: 879-884.

Folkman, J. and Moscona, A. (1978). Role of cell shape in growth control. Nature, 273: 345-349.

Furuta, P.I.; Mineo, T.W.P.; Carrasco, A.O.T.; Godoy, G.S.; Pinto, A.A. and Machado, R.Z. (2007). Neospora caninum infection in birds: experimental infections in chicken and embryonated eggs. Parasitology, 34: 1931-1939.

Griffiths, B. (2001). Scale-up of suspension and anchorage-dependent animal cells. Molecular Biotechnology, 17: 225-238.

Hajikolaei, M.R.H.; Goraninejad, S.; Hamidinejat, H.; Ghorbanpour, M. and Paryab, R. (2007). Occurrence of Neospora caninum antibodies in water buffaloes (Bubalus bulalis) from the south-western region of Iran. Bulletin of the Veterinary Institute in Pulawy, 51: 233-235.

Kang, S.W.; Kweon, C.H.; Lee, E.H.; Choe, S.E.; Jung, S.C. and Quyen, D.V. (2008). The differentiation of transcription between tachyzoites and bradyzoites of in vitro cultured Neospora caninum. Parasitology Research, 103: 1011-1018.

Khodakaram-Tafti, A.; Mansourian, M.; Namavari, M. and Hosseini, A. (2012). Immunohistochemical and polymerase chain reaction studies in Neospora caninum experimentally infected broiler chicken embryonated eggs. Veterinary Parasitology, 188: 10-13.

Lei, Y.; Davey, M. and Ellis, J.T. (2005). Attachment and invasion of Toxoplasma gondii and Neospora caninum to epithelial and fibroblast cell lines in vitro. Parasitology, 131: 583-590.

Lv, Q.; Li, J.; Gong, P.; Xing, S. and Zhang, X. (2010). Neospora caninum: in vitro culture of tachyzoites in MCF-7 human breast carcinoma cells. Experimental Parasitology, 126: 536-539.

Mansourian, M.; Khodakaram-Tafti, A. and Namavari, M. (2009). Histopathological and clinical investigations in Neospora caninum experimentally infected broiler chicken embryonated eggs. Veterinary Parasitology, 166: 185-190.

Namavari, M.; Mansourian, M.; Khodakaram-Tafti, A.; Hosseini, M.H.; Rahimiyan, A.; Khordadmehr, M. and Lotfi, M. (2011). Application of chicken embryonated eggs as a new model for evaluating the virulence of Neospora caninum tachyzoites. Comparative Clinical Pathology, 1346-1349.

Omata, Y.; Kano, R.; Masukata, Y.; Kobayashi, Y.; Igarashi, M.; Maeda, R. and Saito, A. (2005). Development of Neospora caninum cultured with human serum in vitro and in vivo. Journal of Parasitology, 91: 222-225.

Razmi, G.R.; Maleki, M.; Farzaneh, N.; Talebkhan Garoussi, M. and Fallah, A.H. (2007). First report of Neospora caninum-associated bovine abortion in Mashhad area, Iran. Parasitology Research, 100: 755-757.

Reichel, M.P.; Ellis, J.T. and Dubey, J.P. (2007). Neosporosis and hammondiosis in dogs. Journal of Small Animal Practice, 48: 308-312.